Indholdsfortegnelse:
- Nøgleforskel - Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing
- Hvad er Maxam Gilbert sekventering?
- Hvad er Sanger Sequencing?
- Hvad er forskellen mellem Maxam Gilbert og Sanger Sequencing?
- Resumé - Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing
Video: Forskellen Mellem Maxam Gilbert Og Sanger Sequencing
2024 Forfatter: Mildred Bawerman | [email protected]. Sidst ændret: 2023-12-16 08:37
Nøgleforskel - Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing
Nukleotider er de grundlæggende strukturelle enheder og byggesten i DNA. DNA-molekyle er sammensat af en polynukleotidkæde. Der findes fire forskellige nukleotider i DNA. Disse nukleotider er sammensat af fire forskellige nitrogenholdige baser med navnet A (adenin), G (guanin), C (cytosin), T (thymin). Rækkefølgen af nukleotiderne i DNA-molekylet har stor betydning, da den koder for vigtig genetisk information for vækst og udvikling af organismer. DNA-sekventering henviser til den proces, der bestemmer den nøjagtige nukleotidsekvens af DNA'et. Der er forskellige DNA-sekventeringsmetoder. Maxam Gilbert-sekventering og Sanger DNA-sekventering er to metoder til DNA-sekventering, der hører til første generations sekventering. Maxam Gilbert-sekventeringsprocedure bestemmer basesekvensen ved kemisk spaltning af 5'-endemærkede DNA-fragmenter fortrinsvis ved hver af fire nukleotider og gelelektroforese. Sanger-sekventeringsprocedure bestemmer nukleotidsekvensen ved syntetisering af enkeltstrenget DNA ved anvendelse af DNA-polymerase og dideoxynukleotider og gelelektroforese. Dette er nøgleforskellen mellem Maxam Gilbert og Sanger Sequencing.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er Maxam Gilbert
3. Hvad er Sanger-sekventering
4. Side om side-sammenligning - Maxam Gilbert vs Sanger-sekventering
5. Resume
Hvad er Maxam Gilbert sekventering?
Maxam Gilbert-sekventering, også kendt som kemisk sekventeringsmetode, er en teknik, der blev udviklet til at bestemme rækkefølgen af nukleotiderne i DNA. Denne metode blev introduceret af Walter Gilbert og Alan Maxam i 1976 og blev populær, da den kan udføres direkte med oprenset DNA. Maxam Gilbert-metoden tilhører den første generation af DNA-sekventering, og det var den første sekventeringsmetode, der blev brugt bredt af forskere.
Grundprincippet for denne metode ligger i begrænsningen af de endemærkede DNA-fragmenter ved specifikke baser ved hjælp af basespecifikke kemikalier og betingelser og adskillelse af de mærkede fragmenter ved elektroforese som vist i figur 01. Fragmenter adskilles i henhold til deres størrelse på gel. Da fragmenterne er mærket, kan sekvensen af DNA-molekylet let udledes.
Maxam gilbert-metoden bruger basisspecifikke kemikalier til at bryde DNA på specifikke baser. To almindelige kemikalier med navnet dimethylsulfat og hydrazin-kemikalier bruges til selektivt at angribe henholdsvis puriner og pyrimidiner.
Maxam Gilbert sekventeringsmetode udføres via flere trin som følger.
- Oprensning af DNA-sekvensen under anvendelse af restriktionsendonukleaser
- Mærkning af enderne af DNA-fragmenterne ved tilsætning af radioaktive fosfater
- Oprensning af de mærkede fragmenter fra ikke-mærkede fragmenter ved gelelektroforese
- Separation af det endemærkede DNA i fire rør og behandling med basespecifikke kemikalier separat
- Elektroforese af indholdet af hvert rør på separate linjer på en gel- og fragmentseparation i henhold til deres længde.
- Påvisning af fragmenterne ved hjælp af autoradiograf.
Figur 01: Maxam Gilbert sekventering
Hvad er Sanger Sequencing?
Sanger Sequencing er en sekventeringsmetode udviklet af Frederick Sanger og hans kolleger i 1977 for at bestemme basesekvensen for et givet DNA-fragment. Det er også kendt som kædetermineringssekventering eller Dideoxy-sekventeringsmetode. Denne metode fungerer på princippet om selektiv inkorporering af kædeterminerende dideoxynukleotider (ddNTP'er) såsom ddGTP, ddCTP, ddATP og ddTTP af DNA-polymerase under syntesen af enkeltstrenget DNA for at afslutte dannelse af streng. Dideoxynukleotider mangler 3'OH-grupper til dannelse af phosphodiesterbindinger med tilstødende nukleotid. Derfor stoppes strengdannelsen, når en ddNTP er inkorporeret i den nydannende streng under sanger-sekventering.
I denne metode udføres fire separate DNA-syntesereaktioner (PCR) i fire separate rør med en type ddNTP. Andre krav leveres også til rør til PCR inklusive primere, dNTP'er, Taq-polymerase, specifikke betingelser osv. Fire separate reaktioner udføres i fire rør med fire blandinger. Efter PCR-reaktioner varmeresatureres resulterende DNA-fragmenter og adskilles ved gelelektroforese. Derefter visualiseres fragmenterne ved hjælp af enten en mærket (radioaktiv eller fluorescerende) primer eller dNTP'er som vist i figur 02.
Figur 02: Sanger-sekventering
Hvad er forskellen mellem Maxam Gilbert og Sanger Sequencing?
Diff artikel midt foran bordet
Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing |
|
Maxam Gilbert-sekventering er den første teknik, der er udviklet til DNA-sekventering. | Sanger-sekventeringsmetode blev introduceret efter Maxam Gilbert-sekventeringsmetoden. |
Anvendelse | |
Denne metode bruges sjældent. | Sanger-sekventering bruges rutinemæssigt til sekventering. |
Brug af farlige kemikalier | |
Det bruger farlige kemikalier. | Brug af farlige kemikalier er begrænset sammenlignet med Maxam Gilbert-metoden. |
Mærkning til påvisning | |
Denne metode bruger radioaktivt P 32 til mærkning af enderne af DNA-fragmenterne. | Sanger-sekventering bruger radioaktivt eller fluorescerende mærkede ddNTP'er. |
Resumé - Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing
Maxam Gilbert og Sanger-sekventering er to typer DNA-sekventeringsteknikker, der kommer under første generation af DNA-sekventering. Maxam Gilbert-sekventering er den første metode, der blev introduceret til DNA-sekventering i 1976, og den udføres ved at bryde de endemærkede DNA-fragmenter af basespecifikke kemikalier. Derfor er det kendt som kemisk sekventering. Sanger-sekventeringsmetode blev introduceret i 1977 og er baseret på de ddNTP-drevne kædeafslutningsreaktioner. Sanger-sekventeringsmetode populær end Maxam Gilbert-metoden på grund af adskillige ulemper ved Maxam Gilbert-metoden såsom overdreven tidsforbrug, brug af farlige kemikalier osv. Dette er forskellen mellem Maxam Gilbert og Sanger-sekventering.
Anbefalet:
Forskellen Mellem Symmetriske Og Asymmetriske Topmolekyler
Nøgleforskellen mellem symmetriske og asymmetriske topmolekyler er, at symmetriske topmolekyler har en korrekt rotationsakse og to inertimomenter
Forskellen Mellem Sanger Sekventering Og Pyrosekventering
Nøgleforskel - Sanger-sekventering vs pyrosekventerende DNA-sekventering er meget vigtig for DNA-analyse, da viden om de korrekte nukleotider arrangerer
Forskellen Mellem NGS Og Sanger-sekventering
Nøgleforskel - NGS vs Sanger Sequencing Next Generation Sequencing (NGS) og Sanger Sequencing er to typer nukleotidsekventeringsteknikker develo
Forskellen Mellem Nøgleforskellen Mellem Metalliske Og Ikke-metalliske Mineraler
Nøgleforskel - Metallisk vs. ikke-metalliske mineraler Et mineral er en naturligt forekommende fast og uorganisk bestanddel med en bestemt kemisk formel og
Forskellen Mellem Gammel Engelsk Og Mellem Engelsk Og Moderne Engelsk
Old English vs Middle English vs Modern English Old English, Middle English og Modern English er klassificeringen af engelsk, og de