Nøgleforskel - Nitrocellulose vs nylonmembran
Blotting er en vigtig teknik til påvisning af specifikke sekvenser af DNA, RNA og proteiner fra deres blandinger i molekylærbiologi. Det gøres ved hjælp af en membran kaldet blot. Der er forskellige blotting-teknikker såsom nordlig, sydlig og vestlig blotting. Valg af en passende membran til blotting-processen skal udføres omhyggeligt for at forhindre uspecifik binding og forkerte påvisninger. Nitrocellulose, nylon og PVDF er almindeligt anvendte membraner i blottingteknikker. De har forskellige egenskaber. Hovedforskellen mellem nitrocellulose og nylonmembran er, at nitrocellulosemembraner har et højt proteinimmobiliseringspotentiale, mens nylonmembraner har et højt nukleinsyreimmobiliseringspotentiale. Imidlertid anvendes begge typer af membraner ofte i blotting-teknikker.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er en nitrocellulosemembran
3. Hvad er en
nylonmembran 4. Sammenligning side om side -Nitrocellulose vs nylonmembran
5. Oversigt
Hvad er en nitrocellulosemembran?
Nitrocellulosemembran er et almindeligt anvendt membranfilter inden for nukleinsyre- og proteinblotningsteknikker. Det har et højt proteinbindingspotentiale. Derfor anvendes nitrocellulosemembraner i vid udstrækning i western blotting-teknik. Nitrocellulosemembraner er kompatible med alle hybridiseringsteknikker og viser overlegen bindingskapacitet uden interferenser. Nitrocellulosemembraner er naturligt hydrofile. De foretager hydrofil interaktion med molekyler og immobiliserer dem effektivt på membranen. Kommercielle nitrocellulosemembraner fås i to porestørrelser: 0,45 og 0,2 µm.
Figur 01: Nitrocellulosemembran anvendt til western blotting
Hvad er en nylonmembran?
Nylonmembran er en anden type kommerciel membran, der anvendes i blottingteknikker. Det bruges alternativt sammen med nitrocellulosemembraner til sydlig og nordlig blotting. Nylonmembraner er ideelle til sydlig blotting end nitrocellulose på grund af deres høje affinitet til binding med DNA. På grund af flere unikke træk ved nylonmembraner bruger forskere almindeligvis nylonmembraner til blødning i det sydlige og nordlige i stedet for over nitrocellulosemembran. Nylonmembraner anbefales også til stripping og reprobning i modsætning til nitrocellulose.
Figur 02: Nylonmembran anvendt til sydlig blotting
Hvad er forskellen mellem nitrocellulose og nylonmembran?
Diff artikel midt foran bordet
Nitrocellulose vs nylonmembran |
|
| Nitrocellulosemembraner er skøre. | Nylonmembraner er mindre skøre. |
| Håndtering | |
| De er svære at håndtere. | De er nemme at håndtere. |
| Bekræftelse | |
| Ikke-understøttede nitrocellulosemembraner er svære at reprobere. | Reprobning er let med nylonmembraner. |
| Kompatibilitet med forskellige opbevaringsforhold | |
| Nitrocellulosemembraner har mindre styrke til at modstå forskellige opbevaringsforhold. | Nylonmembraner reagerer mere robust på forskellige opbevaringsforhold. |
| Brug | |
| Prewetting er påkrævet. | Forformning er ikke påkrævet for nylonmembraner. |
| Hydrofil natur | |
| Nitrocellulosemembraner er hydrofile i naturen, men er mindre hydrofile end nylonmembraner. | De er meget hydrofile. |
| Immobiliseringspotentiale | |
| Nitrocellulosemembraner har mindre affinitet for nukleinsyrer. Men det har en høj affinitet for proteiner. | Nylonmembraner har et højt bindingspotentiale med nukleinsyrer end nitrocellulosemembraner. |
Resumé - Nitrocellulose vs nylonmembran
Nitrocellulose- og nylonmembraner er specielle ark, der anvendes i blottingteknik til at gengive båndmønsteret på gelen. De muliggør muligheden for at detektere en specifik sekvens eller et protein fra blandingerne ved at immobilisere dem på membranen. Når molekylerne er immobiliseret på membranen, kan den bruges som et substrat til hybridiseringsanalyse med mærkede prober. Nitrocellulosemembran bruges almindeligvis til proteinpåvisning i western blotting-teknik på grund af dens høje bindingsaffinitet med proteiner. Nylonmembraner bruges ofte til sydlig og nordlig blotting. Dette er forskellen mellem nitrocellulose og nylonmembran.
