Nøgleforskel - YAC vs M13 fagvektor
DNA-kloning er en vigtig proces, der muliggør forplantning af vigtige DNA-fragmenter af organismer. Det kræver sammenføjning af specifikt DNA med vektor-DNA for at skabe rekombinant DNA, der transformeres til værtsorganismen. En vektor er et DNA-molekyle, der opfører sig som et middel til at føre fremmed genetisk materiale ind i en anden celle eller organisme. Det skal være i stand til at replikere inde i værtsorganismen og producere flere kopier af rekombinant DNA. Der er forskellige slags vektorer, der anvendes til DNA-kloning. Gær kunstigt kromosom (YAC) og M13 fagvektor er to typer blandt dem. Hovedforskellen mellem YAC og M13 fagvektor er, at YAC er et kunstigt kromosom, der replikerer i gærceller, mens M13 fagvektor er et enkeltstrenget cirkulært DNA af bakteriofag M13, der replikerer i E Coli-celler.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er YAC
3. Hvad er M13-fagvektor
4. Sammenligning side om side - YAC versus M13-fagvektor
5. Resumé
Hvad er en YAC-vektor?
YAC er et kunstigt bygget kromosom, som har evnen til at bære et stort segment af fremmed DNA og replikere inden i gærcellerne. Den har centromere, telomere og autonome replikerende sekvenser, der er vigtige for replikation og stabilitet. YAC bør også bære en selektiv markør eller markører og begrænsningssteder for at gøre det til en effektiv kloningsvektor. Store sekvenser fra 1000 kb til 2000 kb kan indsættes i YAC og overføres til gær.
Figur 01: YAC-vektor
Hvad er M13-fagvektor?
Bakteriofag M13 er en virus, der inficerer og replikerer i E Coli. M13-bakteriofagets genom er lille i størrelse, ca. 6,7 kb. Det er et enkeltstrenget, cirkulært og positivt sense-DNA. Denne virus inficerer specifikt E Coli-bakterier gennem F pilus. Når den først kommer ind i ssDNA i bakterien, syntetiserer den sin komplementære streng og bliver dsDNA eller den replikative form (RF) af M13. RF kan opføre sig som et plasmid i værtsorganismen. DsDNA replikerer inden for E Coli og producerer ssDNA, der bærer nye fager. Disse nye fager frigives kontinuerligt fra E Coli uden at dræbe værtscellen. Infektionen nedsætter imidlertid væksten af E Coli. dsDNA kan ekstraheres fra bakterieceller og anvendes som vektorer i DNA-kloning. De er kendt som M13-fagvektorer. De kan let manipuleres og anvendes på samme måde som plasmidvektorer.
Den iboende evne til infektion af disse M13-fager tjener som en god kvalifikation til at blive anvendt som en vektor i genkloning. Når M13 udvikles til en vektor, skal flere elementer inkorporeres i dets genom. De er et gen for lac repressor (lac I) protein, den operator-proximale region af lac Z-genet, en lac-promotor og et multiple kloningssted (polylinker). Når dsDNA af M13 anvendes som vektorer, kan det behandles som en plasmidvektor. Imidlertid har anvendelsen af ssDNA M13 fordele ved DNA-sekventering og stedrettet mutagenese.
Da M13-fagvektoren bærer flere kloningssteder i lacZ-regionen, kan rekombinerede vektorer let identificeres ved den blå / hvide koloniscreening på agarplader indeholdende IPTG og X-Gal. Blå plader produceret på pladerne indeholder ikke de rekombinerede fager. Derfor kan fager med indsatser vælges til kloningsformålet.
Figur 02: Bakteriofag M13
Hvad er forskellen mellem YAC og M13 Phage Vector?
Diff artikel midt foran bordet
YAC vs M13 Phage Vector |
|
| YAC er et genetisk konstrueret kromosom, som har evnen til at bære et stort segment af fremmed DNA og replikere inden i gærcellerne. | M13 fagvektor er en virusvektor udviklet af bakteriofag M13, der bruges til at indsætte fremmed DNA i E Coli. |
| Formål | |
| YAC'er blev designet til at klone store fragmenter af genomisk DNA i gær. | M13-fagvektorer anvendes til at indsætte fremmed DNA i E Coli. |
| Indsæt længde | |
| YAC'er kan indeholde megabase-størrelse genomiske indsatser (1000 kb - 2000 kb). | Indsættets størrelse er ca. 1.500 bps. |
| Konstruktion | |
| YAC-DNA er vanskeligt at oprense intakt og kræver en høj koncentration til generering af YAC-vektorsystem. | Det sker via cyklisk fotosyntetisk elektronkæde. |
| Stabilitet | |
| YAC er ustabil. | M13-fager kan let ekstraheres. |
| Størrelse | |
| Enzymer er større molekyler. | M13-fager er stabile end YAC. |
Resumé - YAC vs M13 fagvektor
YAC er et kunstigt konstrueret vektorsystem, der bruger en specifik region af gærkromosom til at indsætte store segmenter af genetisk materiale i gærceller. M13 fagvektor er et vektorsystem afledt af bakteriofag M13, der bruger E coli som værtsorganisme. Dette er den største forskel mellem YAC og M13 Phage Vector. Begge er lige så nyttige i rekombinant DNA-teknologi og genkloning.
