Nøgleforskel - Immunfluorescens vs Immunhistokemi
Sygdomsdiagnostik, der anvender molekylærbiologiske metoder, er blevet et voksende område inden for klinisk laboratorieteknologi. Det inkluderer alle tests og metoder til at identificere en sygdom og forstå årsagen til en sygdom ved at analysere DNA, RNA eller udtrykte proteiner i en organisme. Hurtige fremskridt inden for molekylær diagnostik har muliggjort grundlæggende forskning i overførbare og ikke-overførbare sygdomme. Disse bruges til at bestemme ændringer i sekvens- eller ekspressionsniveauer i vigtige gener eller proteiner involveret i sygdom. Immunfluorescens (IF) og Immunhistokemi (IHC) er to sådanne meget anvendte teknikker inden for kræftbiologi. IF er en type IHC, hvor en fluorescensdetektionsmetode bruges til at analysere monoklonale og polyklonale antistoffer, mens IHC bruger kemiske baserede metoder til at detektere de monoklonale og polyklonale antistoffer. Dette er nøgleforskellen mellem IF og IHC.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er immunfluorescens
3. Hvad er immunhistokemi
4. Ligheder mellem immunfluorescens og immunhistokemi
5. Sammenligning side om side - Immunfluorescens vs immunhistokemi i tabelform
6. Resumé
Hvad er immunfluorescens (IF)?
Immunfluorescens er en detektionsteknik, hvor antistofferne, der anvendes i analysen, er mærket ved hjælp af fluorescerende farvestoffer eller fluorescerende proteiner til detektionsformålet. Mærkede sekundære antistoffer kan resultere i uønskede baggrundssignaler; derfor er IF-teknikken baseret på mærkning af selve det primære antistof i øjeblikket for at undgå uønskede signaler under påvisning. Gennem denne teknik forhindres ikke-specifik binding mellem det primære og det sekundære antistof, og det er hurtigere, da der ikke er noget sekundært inkubationstrin involveret. Datakvaliteten forbedres også.
Figur 01: Dobbelt immunfluorescensfarvning for BrdU, NeuN og GFAP
Fluorochromer eller fluorescerende farvestoffer er forbindelser, der kan absorbere stråling, fortrinsvis ultraviolet stråling, der exciteres. Når partiklerne når jordtilstanden fra den ophidsede tilstand, udsender de stråling, der fanges og detekteres af en detektor for at danne et spektrum. Det er meget vigtigt, at det fluorescerende mærke er kompatibelt og stabilt for den bestemte reaktion, og at det skal konjugeres korrekt til antistoffet for at opnå nøjagtige resultater. En af de mest anvendte fluorokromer er fluoresceinisothiocyanat (FITC), som er af grøn farve med absorption og emission peak bølgelængder på henholdsvis 490 nm og 520 nm. Rhodamin, et andet middel, der anvendes i IF, har rød farve og har tydelig absorption og emissionstopbølgelængder på 553 nm og 627 nm.
Hvad er immunhistokemi (IHC)?
IHC er en molekylær testmetode, der praktiseres for at identificere og bekræfte tilstedeværelsen af antigenet i målcellen. Målcellen kan være en infektiøs partikel, et mikrobielt patogen eller en ondartet tumorcelle. IHC anvender monoklonale og polyklonale antistoffer til at bestemme tilstedeværelsen af antigener til stede på celleoverfladen af målcellerne. Teknikken er baseret på antigen-antistofbinding. En detektionsmarkør er konjugeret til disse antistoffer for at detektere tilstedeværelsen eller fraværet af det bestemte antigen. Disse markører kan være kemiske markører, såsom enzymer, fluorescerende mærkede antistoffer eller radiomærkede antistoffer.
Figur 02: Mus-hjerne-skive farvet af immunhistokemi
Den mest populære anvendelse af IHC er inden for kræftcellebiologi for at identificere tilstedeværelsen af ondartede tumorer, men det bruges også til påvisning af infektiøse sygdomme.
Hvad er ligheden mellem immunfluorescens og immunhistokemi?
- Immunfluorescens og immunhistokemi finder sted under in vitro betingelser.
- Begge teknikker er baseret på antigen-antistoffet
- Begge er meget hurtige teknikker.
- Resultaterne af teknikkerne er reproducerbare.
- Begge har forbedret datakvalitet.
- Disse teknikker anvendes til diagnosticering af kræft og infektiøse sygdomme.
Hvad er forskellen mellem immunfluorescens og immunhistokemi?
Diff artikel midt foran bordet
Immunfluorescens vs immunhistokemi |
|
| IF er en detektionsteknik, hvor de antistoffer, der anvendes i analysen, er mærket ved hjælp af fluorescerende farvestoffer eller fluorescerende proteiner til påvisning. | IHC er en detektionsteknik, hvor de antistoffer, der anvendes i analysen, er mærket ved hjælp af kemikalier eller radioaktive elementer til påvisning. |
| Nøjagtighed | |
| Nøjagtighed er højere i IF-teknik sammenlignet med IHC. | Nøjagtigheden er lavere i IHC. |
| Specificitet | |
| IF er mere specifik. | IHC er mindre specifik. |
Resumé - Immunfluorescens vs immunhistokemi
Molekylære mekanismer har medført mange ændringer inden for medicin, hvilket har givet anledning til avancerede molekylære testmetoder, som har medført revolutioner inden for diagnostik. Disse opfindelser har ført til en hurtig og nøjagtig identifikation og bekræftelse af sygdommen, hvilket muliggør en vellykket administration og produktion af lægemidler. Disse teknikker anvendes også i farmakologi for at finde lægemidlets mål og for at bekræfte lægemidlets farmakokinetiske egenskaber under lægemiddelmetabolisme. IF og IHC er to diagnostiske metoder, der er baseret på begrebet antigen- og antistofbinding, skønt påvisningsmetoden i begge teknikker er forskellig. IF bruger princippet om fluorescens til at detektere antigenet og IHC bruger begrebet kemisk konjugering til at detektere antigenet. Dette er forskellen mellem IF og IHC.
Download PDF-version af immunfluorescens vs immunhistokemi
Du kan downloade PDF-version af denne artikel og bruge den til offlineformål som pr. Citatnote. Download venligst PDF-version her Forskellen mellem immunfluorescens og immunhistokemi.
