Nøgleforskel - In situ-hybridisering vs immunhistokemi
Diagnosticering af kræft og infektiøs sygdom er en populær tendens, hvor nye proteomics og genomics-baserede teknikker anvendes til det formål at identificere tumorer eller infektiøse celler, dets spredning og stederne for celleudvikling og analysere det genetiske grundlag for mest smitsomme og ikke-overførbare sygdomme. Dette vil resultere i nøjagtig behandling og design af lægemidler og i udvikling af tilpassede behandlinger for sygdomme. In situ hybridisering (ISH) og immunhistokemi (IHC) er to så vidt anvendte teknikker inden for kræftbiologi, og nøgleforskellen mellem in situ hybridisering og immunkemi ligger i de molekyler, der anvendes i analyseproceduren. I ISH anvendes nukleinsyresonderne til analyse, hvorimod i IHC anvendes monoklonale og polyklonale antistoffer til de diagnostiske bestemmelser.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er in situ-hybridisering
3. Hvad er immunhistokemi
4. Ligheder mellem in situ-hybridisering og immunhistokemi
5. Sammenligning side om side - In situ-hybridisering vs immunhistokemi i tabelform
6. Resumé
Hvad er in situ hybridisering (ISH)?
In situ hybridisering er en nukleinsyrehybridiseringsteknik, som udføres direkte på en del eller en sektion af væv, i hele vævet eller i cellerne. Teknikken afhænger af teorien om Watson Crick komplementær baseparring, hvilket resulterer i enten DNA-DNA-hybrider eller DNA-RNA-hybrider, som kan detektere muterede gener eller identificere det krævede gen af interesse. Enkeltstrengede DNA-sekvenser, dobbeltstrengede DNA-sekvenser, enkeltstrengede RNA-sekvenser eller syntetiske oligonukleotidsekvenser anvendes som prober under hybridiseringsteknik, og disse prober er mærket med et radioaktivt phosphor i sin 5'-ende til identifikationsprocedurer ved autoradiografi eller mærket under anvendelse af fluorescerende farvestoffer. Der findes forskellige typer ISH-teknikker tilgængelige baseret på den anvendte probe-type og den anvendte type visualiseringsteknik.
Figur 01: Fluorescerende in situ-hybridisering
Der er mange anvendelser af ISH, hovedsagelig i molekylær diagnostik af infektiøse sygdomme for at identificere tilstedeværelsen af patogener og for at bekræfte patogenet via molekylær diagnostik. Det bruges også inden for udviklingsbiologi, karyotyping og fylogenetisk analyse og fysisk kortlægning af kromosomer.
Hvad er immunhistokemi (IHC)?
I teknikken med IHC er det analyserede hovedmolekyle antigenet. Under IHC anvendes monoklonale og polyklonale antistoffer til at bestemme tilstedeværelsen af antigener efter infektion eller ondartet celleproliferationsstatus. Teknikken er baseret på antigen-antistofbinding, og enzymmærker anvendes til denne teknik; en sådan anvendelse er ELISA (enzymbundet immunosorbentassay). Markørerne kan også være fluorescerende mærkede antistoffer eller radiomærkede antistoffer.
Figur 02: Immunhistokemi
IHC bruges i vid udstrækning til detektion af kræftceller. De diagnostiske procedurer er målrettet mod de antigener, der findes på tumorcellerne, for at identificere og karakterisere tumoren. Den samme procedure er inkorporeret til diagnosticering af infektiøse agenser. Monoklonale og polyklonale antistoffer anvendes også til at analysere forskellige genprodukter ved at muliggøre antistof-antigen-bindingsreaktionen mellem det ønskede protein og det administrerede syntetiske antistof.
Hvad er ligheden mellem in situ-hybridisering og immunhistokemi?
- ISH og IHC er meget specifikke reaktioner.
- Begge teknikker er meget nøjagtige.
- Begge teknikker kan bruges til diagnosticering af kræft og infektionssygdomme.
- Disse teknikker udføres i sterile in vitro miljøer.
- Begge er hurtige teknikker, der giver reproducerbare resultater.
- ISH og IHC bruger detektionsmetoder såsom radiomærkning og fluorescensteknikker.
Hvad er forskellen mellem in situ hybridisering og immunhistokemi?
Diff artikel midt foran bordet
In situ-hybridisering vs immunhistokemi |
|
| ISH er en nukleinsyrehybridiseringsteknik, der udføres direkte på en del eller en sektion af væv eller hele vævet. | IHC er en teknik, hvor monoklonale og polyklonale antistoffer anvendes til at bestemme tilstedeværelsen af antigener, som er specielle proteinmarkører placeret på celleoverfladerne. |
| Type af analyserede biomolekyler | |
| ISH analyserer nukleinsyrer. | IHC analyserer proteiner-antigener. |
| Basis for biokemisk reaktion | |
| Komplementær baseparring mellem DNA-DNA eller DNA-RNA forekommer i denne teknik. | Antigen-antistof-interaktioner er involveret i immunhistokemi. |
| Enzymkædede detektionsmetoder | |
| Enzymkædede detektionsmetoder kan ikke bruges i ISH. | Enzymkædede detektionsmetoder kan bruges i IHC. |
Resumé - Hybridisering in situ vs immunhistokemi
Molekylær diagnostik er hurtige og bekræftende metoder, der kan anvendes til at identificere en ikke-overførbar sygdom, såsom kræft eller overførbar sygdom, såsom HIV eller tuberkulose, baseret på de molekylære markører, der findes på cellerne, hvilket fører til manifestationen af sygdommen. Molekylære markører kan være til stede i form af udtrykte proteiner eller på det genetiske niveau baseret på hvilke forskellige nye teknikker introduceres for at øge effektiviteten og er mindre besværlige, skønt der er høje omkostninger involveret i disse teknikker. Således afhænger ISH af DNA-DNA eller DNA-RNA hybriddannelse, og IHC afhænger af de specifikke reaktioner mellem antistof og antigen. Dette er forskellen mellem in situ hybridisering.
Download PDF-version af In situ-hybridisering vs immunhistokemi
Du kan downloade PDF-version af denne artikel og bruge den til offlineformål som pr. Citatnote. Download venligst PDF-version her Forskellen mellem in situ-hybridisering og immunhistokemi.
