Nøgleforskel - Stacking Gel vs Separating Gel
Udtrykkene stablingsgel og separeringsgel bruges til at forklare SDS-PAGE-teknikken. SDS-PAGE eller natriumdodecylsulfat-polyacrylamidgelelektroforese er en laboratorieteknik, der bruges til at adskille proteinmolekyler baseret på deres molekylvægt. Teorien bag teknikken er, at proteiner med forskellige molekylvægte viser forskellige migrationshastigheder; molekyler med lav molekylvægt migrerer hurtigere, mens molekyler med høj molekylvægt migrerer langsomt. Mediumet til migration er en gel. Der er to typer geler navngivet som stabelgel og separeringsgel. Hovedforskellen mellem stabelgel og separeringsgel er, at stabelgelens pH er 6,8, hvorimod pH for separeringsgel er 8,8.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er stabelgel
3. Hvad adskiller gel
4. Forholdet mellem stabelgel og separeringsgel
5. Sammenligning side om side - Stabelgel vs separeringsgel i tabelform
6. Resumé
Hvad er Stacking Gel?
Stacking gel er en lavkoncentreret polyacrylamidgel, der placeres på toppen af mere koncentreret opløsningsgel (separeringsgel) i SDS-PAGE-teknik. Stabelgelen bruges til at forbedre opløsningen af elektroforese. Opløsningen øges på grund af forskellen mellem koncentrationer af stabling af gel og opløsning af gel, der påvirker proteinerne i prøven. Da koncentrationen af polyacrylamid i stabelgel er lav, er porestørrelsen højere. Dette hjælper også med at øge separationen.
Stabelgelen er en løs polyacrylamidgel med store porer på ca. 7% polyacrylamid. Disse porer fungerer ikke som en betydelig barriere for store proteinmolekyler. Derfor påvirker denne gel lidt på mobiliteten af disse proteiner. Dette gør adskillelse i henhold til mobiliteten og størrelsen af protein ved at koncentrere dem mellem to geler.
Figur 01: SDS-PAGE Acrylamid Gel
Stackingsgelens pH er 6,8. Dens pH er surt end ved opløsning af gel med 2 pH-enheder. Denne pH indebærer en lavere ionstyrke og dermed en højere elektrisk modstand. Dette fremkalder mobiliteten af proteiner end andre ladede partikler, der er til stede i gelen.
Hvad er adskillelsesgel?
Separering af gel eller opløsning af en SDS-PAGE-teknik er en stærkt koncentreret polyacrylamidgel, der placeres på toppen af en lavkoncentreret stabelgel. Separeringsgelen indeholder en høj mængde polyacrylamid (10%). PH-værdien for denne gel opretholdes som pH = 8,8, hvilket er et højere pH-niveau end stablingsgelens.
Figur 02: Et gelelektroforeseapparat
Når proteinmolekylerne når den separerende gel, sænkes migrationen af disse molekyler, fordi den separerende gel er en gel med høj koncentration med en lille porestørrelse, der kan fungere som en betydelig barriere for bevægelsen af proteinmolekylerne. Denne nedgang gør det muligt for de andre proteiner at migrere langsomt for at indhente, hvilket resulterer i et smalt, koncentreret bånd mellem de to geler.
Hvad er forholdet mellem stabelgel og separeringsgel?
Både Stacking Gel- og Separating Gel-typer bruges i det samme apparat
Hvad er forskellen mellem stabelgel og separeringsgel?
Diff artikel midt foran bordet
Stacking Gel vs Separating Gel |
|
| Stacking gel er en lavkoncentreret polyacrylamidgel, der placeres på toppen af mere koncentreret opløsningsgel (separeringsgel) i SDS-PAGE-teknik. | Separering af gel eller opløsning af gel ifølge en SDS-PAGE-teknik er en stærkt koncentreret polyacrylamidgel, der placeres på toppen af en lavkoncentreret stabelgel. |
| Placering | |
| Stablingsgel anbringes på den opløsende (adskillende) gel. | Separerende gel placeres på bunden af beholderen, der anvendes til gelelektroforese. |
| Koncentration | |
| Koncentrationen af stabelgel er høj. | Koncentrationen af separeringsgel er lav. |
| Polyacrylamid indhold | |
| Stacking gel indeholder ca. 7% polyacrylamid. | Separerende gel indeholder ca. 10% polyacrylamid. |
| pH | |
| Stackingsgelens pH er 6,8. | Adskillelsesgelens pH er 8,8. |
| Porestørrelse | |
| Store porestørrelser er til stede i stabelgel. | Små porestørrelser er til stede i separeringsgel. |
| Løsning | |
| Stacking gel giver bedre opløsning. | Separering af gel giver en dårlig opløsning. |
Resumé - Stacking Gel vs Separating Gel
Stablingsgel og separeringsgel er to typer polyacrylamidgeler, der bruges til bedre separering af proteinmolekyler i en given prøve. Forskellen mellem stabelgel og separeringsgel er, at stablagelens pH er 6,8, mens pH for separeringsgel er 8,8.
