Video: Forskellen Mellem PCR Og Realtids PCR
2024 Forfatter: Mildred Bawerman | [email protected]. Sidst ændret: 2023-12-16 08:37
PCR vs PCR i realtid
PCR- eller polymerasekædereaktion er en revolutioneret opdagelse inden for moderne molekylærbiologi, som først blev udviklet af kemikeren Kary Mullis i 1983. Det gør det muligt at amplificere en enkelt sekvens i et komplekst DNA til analyse. Den grundlæggende idé med PCR er, at to primere, der er komplementære til de modsatte tråde af en DNA-sekvens, er orienteret mod hinanden; primerne producerer komplementære tråde, der hver indeholder den anden primer. Derfor er resultatet en stor mængde af en sekvens svarende til DNA'et, der ligger mellem de to primere. DNA-polymeraseenzym anvendes til at udvide primerne i PCR. DNA-polymerase er et termostabilt enzym, og det har evnen til at overleve ved høje temperaturer (94 til 95 ° C), der anvendes til denaturering af skabelon-DNA.
PCR involverer tre trin, nemlig gentagne runder af denaturering, annealing af primere og syntese af DNA. En termocycler-maskine bruges til at udføre denne reaktion, så den kan programmeres til at ændre temperaturerne hurtigt og præcist. Anvendelser af PCR er kriminelle efterforskninger, DNA-fingeraftryk, påvisning af patogener og analyse af DNA fra tidlige menneskelige arter.
Hvad er konventionel PCR?
Der er tre hovedfaser af konventionel PCR, nemlig; DNA-amplifikationstrin, adskillelse af PCR og påvisning af produkter. Adskillelse af DNA-segmenter udføres typisk ved agarosegelelektroforese. Produkterne farves derefter med etheiduimbromid. Endelig opnås detektion ved visualisering af bånd på geler under UV-lys. Derfor udtrykkes de endelige resultater af konventionel PCR ikke som tal. Normalt er den konventionelle PCR kun i stand til at detektere en enkelt parameter.
Hvad er PCR i realtid?
Real-time PCR kan registrere amplifikation af produkter, når produkterne syntetiseres. Med udviklingen af teknologi er PCR blevet en meget populær teknik, især til påvisning og identifikation af bakterier i fødevarer. Realtids-PCR bruger et fluorescerende farvesystem og en termocycler udstyret med fluorescerende detektionsfunktion.
Hvad er forskellen mellem konventionel PCR og realtids PCR?
• Konventionel PCR er mere tidskrævende, da den bruger gelelektroforese til at analysere de amplificerede PCR-produkter. I modsætning hertil er PCR i realtid mindre tidskrævende, da det kan detektere amplifikationer i de tidlige faser af reaktionen.
• PCR i realtid indsamler data i den eksponentielle vækstfase af PCR, mens traditionel PCR indsamler data ved slutpunktet for reaktionen.
• Slutpunktsresultaterne for konventionel PCR er muligvis ikke særlig præcise, men resultaterne af realtids-PCR er meget præcise.
• Real-time PCR er mere følsom end konventionel PCR.
• Konventionel PCR har meget dårlig opløsning, mens realtids PCR kan registrere meget små ændringer på grund af den høje opløsning.
• Slutpunktsdetektering af konventionel PCR har kort dynamisk område, mens realtids PCR-detektion har bredt dynamisk område.
• I modsætning til konventionel PCR findes automatiske detektionsteknikker i realtid PCR.
• Konventionel PCR er meget sofistikeret og arbejdskrævende mere end PCR i realtid.
• I modsætning til realtids-PCR kan konventionel PCR ikke skelne mellem døde og levende bakterier.
• Realtids-PCR bruger fluorescerende farvestofsystem til at detektere produkterne, mens konventionel PCR bruger ethidiumbromid og UV-lys til at visualisere bånd i agarosegelmediet.
Anbefalet:
Forskellen Mellem PCR Og DNA-replikering
Nøgleforskel - PCR vs DNA-replikering DNA-replikation er en naturlig proces, der forekommer i levende organismer. Det involverer produktion af to identiske
Forskellen Mellem PCR-primere Og Sekventeringsprimere
Hovedforskel - PCR-primere vs sekventeringsgrunder Med den nylige udvikling inden for molekylærbiologi blev forskellige genetiske teknikker udviklet
Forskellen Mellem PCR Og DNA-sekventering
Nøgleforskel - PCR vs DNA-sekventering PCR og DNA-sekventering er to vigtige teknikker inden for molekylærbiologi. Polymerase Chain Reaction (PCR) er p
Forskellen Mellem Nøgleforskellen Mellem Metalliske Og Ikke-metalliske Mineraler
Nøgleforskel - Metallisk vs. ikke-metalliske mineraler Et mineral er en naturligt forekommende fast og uorganisk bestanddel med en bestemt kemisk formel og
Forskellen Mellem Gammel Engelsk Og Mellem Engelsk Og Moderne Engelsk
Old English vs Middle English vs Modern English Old English, Middle English og Modern English er klassificeringen af engelsk, og de