Nøgleforskel - Valgbar markør vs reportergen
Genteknik anvendes til at overføre vigtige gener fra organisme til en anden organisme. Indsættelse af et fremmed gen i en anden organisms genom og gør det udtrykt i værtscellen er de vanskeligste trin i genoverførsel. For at detektere succesen med transformationsprocessen anvendes en selekterbar markør og et reportergen i det rekombinante molekyle. En selekterbar markør er en DNA-sekvens eller et gen, der udtrykker og selekterer de transformerede celler fra de ikke-transformerede celler. Et reportergen er et andet gen, der bruges til at skelne transformerede celler og til at kvantificere eller detektere, hvordan det indsatte gen fungerer inden for værten. Hovedforskellen mellem selekterbar markør og reportergen er, at den selekterbare markør bruges til at screene de ikke-transformerede celler ud og signalere de transformerede celler, mens reportergenet bruges til at kvantificere niveauet for genekspression inden for værten.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad der kan vælges markør
3. Hvad er reportergen
4. Sammenligning side om side - Valgbar markør vs reportergen
5. Resumé
Hvad er en valgbar markør?
I genteknologi indsættes genet af interesse i en passende vektor og omdannes til værtsorganismer. Imidlertid er transformation kun vellykket i de kompetente værtsceller, og der er en mulighed for værtsceller til at afvise optagelsen af fremmed DNA. Derfor er differentiering af de transformerede og ikke-transformerede celler vigtig for at fortsætte med yderligere eksperimentering. Derfor inkorporerer forskere et selekterbart markørgen til vektor for nem udvælgelse af de transformerede celler fra ikke-transformerede celler. En selekterbar markør er en DNA-sekvens, især et gen, der er nyttigt til identifikation af de transformerede celler. Dette markørgen udviser et træk, der passer til en kunstig udvælgelse af transformerede celler fra ikke-transformerede celler på et medium.
Mest almindelige selekterbare markører anvendt i molekylærbiologi er antibiotikaresistente gener. Et antibiotikaresistensgen indsættes i vektoren og transformeres til værtsceller især til værtsbakterien. Det bestemte antibiotikum er inkorporeret i bakteriens voksende medium. På grund af tilstedeværelsen af den selektive markør, under de selektive betingelser, er det kun celler, der indeholder den passende valgbare markør, der kan overleve. Ikke-transformerede celler er ude af stand til at vokse i det antibiotikumholdige medium. Derfor kan transformerede celler let identificeres på grund af den selekterbare markør, som er antibiotikaresistent.
Gener, der giver egenskaber for antimetabolitter, herbicider, anvendes som selektive markører i kloningsvektorer i plantegenetik. Denne samtransformation af selektive markører til genetisk modificerede organismer har imidlertid negative virkninger på miljøet og mennesket. Frigivelse af antibiotikaresistente bakterier kan øge antibiotikaresistens hos humane patogener. Det kan forurene produktet eller biomassen med antibiotika og kan miste det selektive tryk som følge af nedbrydning og inaktivering af antibiotika.
Figur 01: Plasmidvektor til genoverførsel med valgbar markør
Hvad er en reportergen?
Reportergener er gener, der muliggør påvisning eller måling af den indsatte genekspression. Disse reportergener kan bindes til regulatoriske sekvenser af genet af interesse for at signalere ekspressionsplacering eller -niveauer. Derfor transkriberes de under ekspressionen af gener under den samme promotor til en enkelt mRNA-sekvens og translateres derefter til et protein, som kan indikere niveauet for genekspression.
Reportergener er af forskellige typer, og de indeholder visuelt identificerbare karakteristika, som normalt er involveret i fluorescerende og selvlysende proteiner. Gener, der koder fluorescerende protein og enzymer, omdanner usynlige substrater til selvlysende eller farvede produkter ved at signalere den vellykkede genekspression og give mulighed for kvantificering af genekspressionen.
Figur 02: Reportergenekspression
Hvad er forskellen mellem valgbar markør og reportergen?
Diff artikel midt foran bordet
Valgbar markør vs reportergen |
|
| Valgbar markør er en slags DNA-sekvens, som hjælper med at skelne transformerede celler med ikke-transformerede celler. | Reportergen er et gen, der hjælper med at kvantificere ekspressionen af det ønskede gen indsat i værtscellen. |
| Producerede enheders art | |
| Gener er kodet med egenskaber, der hjælper med kunstig selektion på voksende medier. | Gener er kodet med visuelt identificerbare egenskaber. |
| Anvendelse | |
| Antibiotikaresistensgener, antimetabolitgener, herbicidresistensgener osv. Er eksempler på valgbar markør. | Gener koder for grønt fluorescerende protein, β-glucuronidase, Chloramphenicol acetyltransferase, Rødt fluorescerende protein osv. Er eksempler. |
Resumé - Valgbar markør vs reportergen
Valgbare markører tillader, at transformerede celler vokser i selektive medier doseret med bestemt antibiotikum eller herbicid. De bruges til tidlig udvælgelse af transformerede celler. Reportergener bruges til at kvantificere ekspressionsniveauet for det ønskede indsatte gen. De tillader også differentiering af transformerede og ikke-transformerede celler. Dette er forskellen mellem valgbar markør og reportergen. Både selekterbar markør og reportergen betragtes som vigtige markører inden for genteknologi.
