Nøgleforskel - Gelelektroforese vs SDS-side
Gelelektroforese er en teknik, der adskiller makromolekyler i et elektrisk felt. Det er en almindelig metode i molekylærbiologi at adskille DNA, RNA og proteiner fra blandinger efter deres molekylære størrelser. SDS Page er en type gelelektroforese, der bruges til at adskille proteiner fra en proteinblanding baseret på deres størrelse. Gelelektroforese er et udtryk, der bruges til at henvise til den normale teknik anvendt til DNA-, RNA- og proteinseparation, mens SDS Page er en type gelelektroforese. Dette er nøgleforskellen mellem gelelektroforese og SDS-side.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er gelelektroforese
3. Hvad er SDS Side
4. Sammenligning side om side - Gelelektroforese vs SDS side
5. Oversigt
Hvad er gelelektroforese?
Gelelektroforese er en almindelig teknik, der anvendes i laboratorier til at adskille ladede molekyler såsom DNA, RNA, proteiner osv. Fra deres blandinger. En gel anvendes i gelelektroforese. Det fungerer som en molekylsigte. Der er to typer geler anvendt i gelelektroforese, nemlig agarose og polyacrylamid. Valg af en gel- og gelpræparation er vigtige faktorer, der skal overvejes i gelelektroforese, da gelens porestørrelse skal manipuleres omhyggeligt til en god adskillelse af molekyler gennem gelelektroforese. Gelelektroforese har et elektrisk felt forbundet med to ender af gelen. Den ene ende af gelen viser en positiv ladning, mens den anden ende er negativt ladet.
DNA og RNA er negativt ladede molekyler. Når de først er fyldt i gelen fra den negative ende af gelen og påført det elektriske felt, vandrer de gennem gelporerne mod den positivt ladede ende af gelen. Migrationshastigheden afhænger af molekylets ladning og størrelse. Mindre molekyler vandrer let gennem gelporerne end større molekyler. Derfor kører mindre molekyler en lang afstand gennem gelen, og de større molekyler kører en kort afstand. For at observere bevægelse af molekyler på gelen anvendes specielle farvestoffer. Det elektriske felt påføres i en bestemt periode og stoppes for at forhindre tab af molekyler og for at holde molekylerne i deres vandrede positioner. Forskellige bånd kan observeres i gelen. Disse bånd repræsenterer molekylerne i forskellige størrelser. Derforgelelektroforese er nyttig til at differentiere molekyler efter deres størrelse.
Gelelektroforese er inkorporeret i forskellige teknikker som en præparativ teknik i molekylærbiologi, såsom PCR, RFLP, kloning, DNA-sekventering, Southern blotting, genomkortlægning osv.
Figur 01: Agarosegelelektroforese
Hvad er SDS-side?
Natriumdodecylsulfatpolyacrylamidgelelektroforese (SDS-side) er en type gelelektroforese, der bruges til at adskille proteiner. Når gelelektroforese bruges til at adskille proteiner, er der behov for specielle behandlinger, da proteiner ikke er negativt ladede som DNA og RNA og ikke migrerer mod den positive ende eller den negative ende. Derfor er proteiner denatureret og overtrukket med en negativ ladning før gelelektroforese. Det gøres ved hjælp af et vaskemiddel kaldet natriumdodecylsulfat (SDS). Gelelektroforesen, der anvender SDS og en polyacrylamidgel til det bærende medium, er kendt som SDS Page. Denne teknik bruges almindeligvis i biokemi, genetik, retsmedicin og molekylærbiologi.
Under SDS-siden blandes proteiner med SDS. SDS udfolder proteiner i en lineær form og overtrækker dem med en negativ ladning, der er proportional med deres molekylære masse. På grund af den negative ladning migrerer proteinmolekyler mod den positive ladningsende af gelen og adskilles efter deres molekylære masser. På SDS-side anvendes polyacrylamid som den faste bærer af gelen. Den egentlige adskillelse af proteinerne afhænger hovedsageligt af gelens egenskaber. Derfor skal præparation af polyacrylamidgel udføres omhyggeligt, og korrekte koncentrationer af polyacrylamid skal anvendes. Polyacrylamidgeler viser høj opløsning end agarosegel. Derfor betragtes SDS Page som en opløsning i høj opløsning til proteinseparation.
SDS Page er en type denaturerende gelelektroforese. Det har en væsentlig begrænsning i proteinanalyse. Da SDS denaturerer proteiner før adskillelse, tillader det ikke påvisning af enzymatisk aktivitet, proteinbindende interaktioner, proteinkofaktorer osv.
Figur 02: SDS side
Hvad er forskellen mellem gelelektroforese og SDS-side?
Gelelektroforese vs SDS-side |
|
| Gelelektroforese er en metode, der udføres for at adskille makromolekyler ved hjælp af et elektrisk felt. | SDS Page er en gelelektroforeseteknik med høj opløsning, der bruges til at adskille proteiner baseret på deres masse. |
| Gel Run | |
| Det kan udføres vandret eller lodret. | SDS-siden kører altid lodret. |
| Grundlag for adskillelse | |
| Adskillelse sker i henhold til opladning og størrelse. | Proteinseparation sker i henhold til masse og ladning. |
| Løsning | |
| Agarosegelelektroforese har lav opløsning, og polyacrylamidgelelektroforese har en højere opløsning | SDS Page har en bedre opløsning. |
| Denaturering | |
| Gelelektroforese inkluderer både denaturerende og ikke-denaturerende teknikker. | SDS Page denaturerer proteiner inden separation. |
Resumé - Gelelektroforese vs SDS-side
Gelelektroforese er en almindelig teknik, der anvendes til separation og analyse af DNA, RNA og proteiner baseret på deres størrelse og ladning. Der er to hovedtyper af gelelektroforese, nemlig agarosegelelektroforese og polyacrylamidgelelektroforese. Agarosegeler anvendes hovedsageligt til nukleinsyreseparation; når der kræves højere opløsning, anvendes polyacrylamidgeler. SDS Page er en type gelelektroforese, der almindeligvis bruges til at adskille komplekse blandinger af proteiner. Det betragtes som en proteinseparationsteknik med høj opløsning. Dette er forskellen mellem gelelektroforese og SDS-side.
