Nøgleforskel - vandret vs lodret gelelektroforese
Gelelektroforese er en laboratorieteknik, der anvendes i genetik til at adskille blandinger indeholdende DNA, RNA og andre proteiner i henhold til deres respektive ladning og molekylære størrelse. DNA, RNA eller proteiner, der skal adskilles i denne metode, køres gennem en gel, der indeholder små porer. Molekylerne drives gennem gelen af et elektrisk felt. Molekylerne passerer gennem gelens porer, og bevægelseshastigheden er omvendt proportional med deres respektive længder. Derfor vil molekyler med lavere molekylstørrelse bevæge sig hurtigere end molekyler med en højere molekylvægt. Det elektriske felt genereres af forskellen i ladning i to ender af gelen. Den ene ende indeholder en positiv ladning, og den anden ende indeholder en negativ ladning. Da DNA- og RNA-molekyler er negativt ladede,de vil blive tiltrukket mod den positivt ladede ende af gelen. Gelelektroforese kan have to forskellige metoder: vandret gelelektroforese og lodret gelelektroforese. I vandret gelelektroforese er gelen til stede i en vandret retning og nedsænkes i en kontinuerlig løbebuffer, som er til stede inde i selve gelboksen. I lodret gelelektroforese er buffersystemet orienteret lodret og er diskontinuerligt med to kamre til stede på henholdsvis toppen og bunden med en katode og en anode. Dette er nøgleforskellen mellem vandret og lodret gelelektroforese.gelen er til stede i en vandret retning og er nedsænket i en kontinuerlig løbende buffer, der er til stede inde i selve gelboksen. I lodret gelelektroforese er buffersystemet orienteret lodret og er diskontinuerligt med to kamre til stede på henholdsvis toppen og bunden med en katode og en anode. Dette er nøgleforskellen mellem vandret og lodret gelelektroforese.gelen er til stede i en vandret retning og er nedsænket i en kontinuerlig løbende buffer, der er til stede inde i selve gelboksen. I lodret gelelektroforese er buffersystemet orienteret lodret og er diskontinuerligt med to kamre til stede på henholdsvis toppen og bunden med en katode og en anode. Dette er nøgleforskellen mellem vandret og lodret gelelektroforese.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er vandret gelelektroforese
3. Hvad er lodret gelelektroforese
4. Ligheder mellem vandret og lodret gelelektroforese
5. Sammenligning side om side - Vandret vs lodret gelelektroforese i tabelform
6. Resumé
Hvad er vandret gelelektroforese?
Horisontal gelelektroforese anvender den grundlæggende teori til adskillelse af DNA, RNA eller proteinmolekyler i henhold til deres respektive molekylære størrelse og ladning. I denne teknik er gelen til stede i en vandret retning og nedsænkes i en buffer, der er kontinuerlig. Agarosegel bruges til at adskille gelboksen i to rum. Den ene ende af gelboksen indeholder en anode, mens den anden ende indeholder en katode. Når der anvendes en strøm, tillader bufferen, der anvendes i denne teknik, oprettelsen af en ladningsgradient. Når opladningen påføres, har gelen en tendens til at varme op. Bufferen fungerer også som et kølemiddel, der opretholder temperaturen på de optimale niveauer. Recirkulation af kørebufferen forhindrer dannelsen af en pH-gradient. Et diskontinuerligt buffersystem kan ikke anvendes i vandret gelelektroforese, da de to rum i gelsystemet bliver forbundet med den kørende buffer. Acrylamid anvendes under gelelektroforese til at adskille proteinblandinger.
Figur 01: vandret gelelektroforese
I vandret gelelektroforese kan acrylamid ikke anvendes, da gelboksen udsættes for ilt. På grund af tilstedeværelsen af ilt hæmmes polymerisation af acrylamid, og dette forstyrrer dannelsen af gelen. Horisontal gelelektroforese er en ubesværet metode, der anvendes til adskillelse af DNA og RNA.
Hvad er vertikal gelelektroforese?
Lodret gelelektroforeseteknik fungerer i henhold til den primære teori om gelelektroforese, men det anses for at være mere kompleks end vandret gelelektroforesemetode. Denne teknik anvender en diskontinuerlig buffer. En katode er placeret i det øverste kammer, og anoden er placeret i det nederste kammer. Elektroderne i hvert rum giver det krævede elektriske felt. Et tyndt lag gel hældes mellem de to monterede glasplader. Derfor er den øverste del af gelen nedsænket i det øverste kammer, og den nederste del af gelen er nedsænket i kammeret i bunden. Når strømmen er påført, bevæger en lille del af bufferen sig til bundkammeret fra det øverste kammer gennem gelen. Den nuværende, der anvendes i denne teknik, er på minutter.
Figur 02: Lodret gelelektroforese
I lodret gelelektroforese flyder buffer kun gennem gelen. Dette muliggør nøjagtig kontrol af spændingsgradienten under adskillelsestrinet. Acrylamidgel kan anvendes, da rumene ikke udsættes for atmosfærisk ilt. På grund af den mindre porestørrelse af acrylamidgel kan præcis adskillelse opnås med en højere opløsning.
Hvad er ligheden mellem vandret og lodret gelelektroforese?
- Begge systemer fungerer i henhold til den grundlæggende teori om gelelektroforese.
- Anode og katode bruges til at tilvejebringe det krævede elektriske felt i begge systemer.
Hvad er forskellen mellem vandret og lodret gelelektroforese?
Diff artikel midt foran bordet
Vandret vs lodret gelelektroforese |
|
| Horisontal gelelektroforese er en gelelektroforeseteknik, hvor gelen er til stede i vandret retning. | Lodret gelelektroforese er en gelelektroforeseteknik, hvor gelen er orienteret lodret. |
| Buffer | |
| Horisontal gelelektroforese består af en kontinuerlig buffer. | Den kørende buffer er diskontinuerlig i lodret gelelektroforese. |
| Brug af akrylamid | |
| Acrylamid kan ikke anvendes til vandret gelelektroforese, da gelboksen udsættes for atmosfærisk ilt. | Da gelen ikke udsættes for atmosfærisk ilt på grund af to separate kamre, kunne acrylamid anvendes til lodret gelelektroforese. |
| Fungere | |
| Horisontal gelelektroforese bruges oftere til adskillelse af DNA- og RNA-blandinger, men ikke proteiner. | Lodret gelelektroforese bruges til at adskille blandinger af protein. |
Resumé - Horisontal vs lodret gelelektroforese
Gelelektroforese er laboratorieteknik, der i vid udstrækning anvendes til adskillelse af blandinger, der indeholder molekyler af DNA, RNA og proteiner. Der er to metoder til gelelektroforese: vandret og lodret gelelektroforese. I vandret gelelektroforese er den løbende buffer kontinuerlig, mens den i lodret gelelektroforese er diskontinuerlig. Dette er forskellen mellem vandret og lodret gelelektroforese. Begge systemer fungerer efter det fælles princip om gelelektroforese.
Download PDF-version af vandret vs lodret gelelektroforese
Du kan downloade PDF-version af denne artikel og bruge den til offlineformål som pr. Citatnote. Download venligst PDF-version her Forskellen mellem vandret og lodret gelelektroforese.
