Nøgleforskel - SDS-side vs Western Blot
Western blotting er en teknik, der detekterer et specifikt protein fra en proteinprøve. Denne teknik udføres via flere vigtige trin: gelelektroforese, blotting og hybridisering. Natriumdodecylsulfatpolyacrylamidgelelektroforese (SDS-side) er en slags gelelektroforeseteknik, der bruges til at adskille proteiner efter deres størrelse (molekylvægt). Western blot er et specielt ark af en blottingmembran, der bruges til at overføre det samme mønster af proteinerne i SDS-siden. Hovedforskellen mellem SDS-side og western blot er, at SDS-side tillader adskillelse af proteiner i en blanding, mens western blot tillader påvisning og kvantificering af et specifikt protein fra en blanding. Begge er nyttige i proteinanalysestudier.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er SDS-side
3. Hvad er Western Blot
4. Sammenligning side om side - SDS-side vs Western Blot
5. Sammendrag
Hvad er SDS-side?
SDS Page er en gelelektroforeseteknik, der anvendes til proteinseparation. Det bruges almindeligvis i biokemi, genetik, retsmedicin og molekylærbiologi. Når proteinerne er ekstraheret fra prøven, køres de på en gel bestående af SDS og polyacrylamid. SDS er et anionisk detergent, der anvendes til at linearisere proteiner (denaturerende proteiner) og til at bibringe en negativ ladning til lineariserede proteiner, der er proportionale med deres molekylære masse. Polyacrylamid bliver den faste understøtning for gelen. Denaturerede proteiner, som er negativt ladede, migrerer mod den positive ende af apparatet gennem gelen. I henhold til størrelsen af proteinerne varierer migrationshastighederne mellem proteinerne, og der sker adskillelse. Derfor er SDS-siden nyttig til separering af individuelle proteiner baseret på deres størrelse.
Fremstillingen af polyacrylamidgel til fraktionering af proteiner er et afgørende trin i SDS-siden. Den korrekte koncentration af polyacrylamid og typen af det tværbindingsmiddel, der anvendes, påvirker stærkt de fysiske egenskaber af gelen, hvilket gør den faktiske adskillelse af de forskellige proteiner. Porestørrelserne på gelen skal styres korrekt for effektiv adskillelse. Imidlertid betragtes SDS Page som en højopløsnings-proteinseparationsteknik.
SDS Page-teknik har en væsentlig begrænsning i proteinanalyse. Da SDS denaturerer proteiner før adskillelse, tillader det ikke påvisning af enzymatisk aktivitet, proteinbindende interaktioner, proteinkofaktorer osv.
Figur 01: SDS-side
Hvad er Western Blot?
Western blotting-teknik muliggør påvisning af et specifikt protein fra en proteinblanding og måling af mængden og molekylvægten af proteinet. Western blot er den membran, der anvendes under blottingproceduren for at få spejlbilledet af proteinmønstrene i SDS-polyacrylamidgel. Membranen, der anvendes til western blotting, består for det meste af nitrocellulose eller polyvinyliden difluorid (PVDF). Membranen med det overførte protein kan bruges til at identificere det ønskede protein. Det kræver antistof af høj kvalitet til påvisning af det ønskede protein ved hybridisering. Antistoffet binder til dets specifikke antigen og afslører tilstedeværelsen af det ønskede antigen, som er et protein.
Overførsel af proteinerne fra SDS-polyacrylamidgel til western blot udføres ved elektroblotting. Det er en effektiv og hurtig metode, der får proteinerne til at elektroforese ud af gelen og passere over på nitrocellulosemembranen (western blot).
Figur 02: Western Blot
Hvad er forskellen mellem SDS-side og Western Blot?
Diff artikel midt foran bordet
SDS Side vs Western Blot |
|
| SDS Page er en gelelektroforeseteknik. | Western blot er en teknik, der udføres på en membran til at detektere et specifikt protein fra en blanding. |
| Brug | |
| SDS-side muliggør adskillelse af proteiner i henhold til deres størrelse. | Western blot tillader overførsel af proteiner på SDS-sidegelen uden at ændre dets mønster og tillader hybridisering med specifikke antistoffer. |
| Ulemper | |
| Proteindenaturering, høje omkostninger og tilstedeværelse af neurotoksinkemikalier er ulemperne ved denne teknik. | Denne teknik er tidskrævende og kræver gode erfarne personlige og specifikke kontrollerede forhold. |
Resumé - SDS-side vs Western Blot
SDS-side og western blot er to metoder involveret i proteinanalyse. SDS Page tillader let adskillelse af proteiner på en gel i henhold til deres molekylvægt. Western blot hjælper med at bekræfte tilstedeværelsen og mængden af et specifikt protein gennem hybridisering med specifikke antistoffer. Dette er forskellen mellem SDS-side og western blot.
