Nøgleforskel - Gram Stain vs Acid Fast
Bakterier er meget små mikroorganismer. De er gennemsigtige, og deres påvisning er vanskelig under leve- og ufarvede forhold. Således udvikles forskellige farvningsmetoder for at lette bakteriedetektion. Der er tre hovedtyper af farvningsteknikker: enkel farvning, differentiel farvning og strukturel farvning. Differentiel farvning er en teknik, der bruger mere end en plet til at differentiere bakterier. Gramplet og syrefast plet er mest populært kendt som differentielle pletter. Gramfarvning er en differentieret farvningsteknik, der adskiller bakterier i to grupper kendt som Gram-positive bakterier og Gram-negative bakterier. Den syrehurtige plet er en differentiel plet, der bruges til at identificere syrehurtige organismer såsom Mycobacterium fra ikke-syrehurtige organismer. Dette er nøgleforskellen mellem Gram-plet og Acid Fast-plet.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er Gram Stain
3. Hvad er syrehurt
4. Ligheder mellem Gram Stain og Acid Fast
5. Sammenligning side om side - Gram Stain vs Acid Fast i tabelform
6. Resumé
Hvad er Gram Stain?
Gram-plet er en vigtig differentiel farvningsteknik, der anvendes til bakteriel identifikation i mikrobiologi. Denne teknik blev introduceret af den danske bakteriolog Hans Christian Gram i 1884. Gramfarvning kategoriserer bakterier i to hovedgrupper kaldet grampositive og gramnegative, hvilket er meget vigtigt i bakterieklassificering og identifikation. Mikrobiologer udfører gramfarvning som et indledende trin i bakteriekarakterisering under deres studier.
Bakterier er grupperet baseret på forskellene i deres cellevæg. Grampositive bakterier er sammensat af et tykt peptidoglycanlag i deres cellevæg, mens gramnegative bakterier er sammensat af et tyndt peptidoglycan-lag i deres cellevæg. Resultatet af gramfarvningen vil være baseret på forskellen i tykkelsen af peptidoglycanlaget af cellevæggen.
Gramfarvning udføres under anvendelse af fire forskellige reagenser, nemlig; primær plet, mordant, affarvningsmiddel og modplet. Krystalviolet og safranin anvendes som henholdsvis den primære og modpletterne, mens gram jod og 95% alkohol anvendes som henholdsvis mordant og affarvningsmiddel. De grundlæggende trin i gram plet er som følger;
- En bakteriel udstrygning forberedes på et rent glasglas, varmefikseres og afkøles.
- Udstrygning oversvømmes med krystalviolet i 1-2 minutter.
- Udstryg skylles med langsomt rindende vand fra hanen for at fjerne overskydende pletter.
- Gramjod påføres udstrygningen i 1 minut.
- Udstryg skylles med langsomt rindende vand fra hanen
- Udstrygning vaskes med 95% alkohol i 2-5 sekunder og skylles med langsomt rindende vand fra hanen.
- Udstrygning er kontrastfarvet med safranin i 1 minut
- Udstryg skylles med langsomt rindende vand fra hanen, tørres og observeres under mikroskopet.
I slutningen af gramfarven observeres gramnegative bakterier i lyserød farve, mens gram positive bakterier observeres i lilla farve.
Figur 01: Gramnegative og Gram-positive bakterier
Resultatet af gramfarven bestemmes af tykkelsen af peptidoglycanlaget i deres cellevæg. Under affarvningstrinnet fjernes primær plet og mordanten let fra de gramnegative bakterier og bliver farveløse, da de har et tyndt peptidoglycanlag. Den primære plet bevares i de gram-positive bakterier, da de har et tykt peptidoglycanlag. Modpletten vil ikke være effektiv for gram-positive bakterier på grund af fastholdelsen af den primære plet. Således vil gram-positive bakterier være synlige i primær pletfarve, dvs. lilla farve. Modpletten pletter de gramnegative bakterier, og de vil være synlige i farve, som er safraninfarven. Derfor er det let at kategorisere bakterier i to grupper efter gramfarvning, og det er værdifuldt i bakteriedifferentiering og identifikation.
Hvad er syrehurt?
Syrefasthed er en fysisk egenskab for visse bakterier, især deres modstandsdygtighed over for affarvning af syrer under farvningsprocedurer. Når de er farvet, modstår disse organismer fortyndet syre- og eller ethanolbaseret affarvningsprocedure, der er almindelig i mange farvningsprotokoller. Således gives navnet 'syrefast' til disse organismer. Denne egenskab er vist på grund af at have et højt niveau af voksagtigt materiale (mycolsyrer) i deres cellevægge. Denne test er kritisk til identifikation af Mycobacterium tuberculosis.
Figur 2: Syrehurtige mycobakterier
Denne syrehurtige plet blev udviklet af Paul Ehrlich i 1882. Ehrlichs syrehurtige teknik blev modificeret af Ziehl-Neelsen og bruges nu oftere. Syrefarvningsprocedure involverer tre forskellige reagenser. Carbol fuschin bruges som den primære plet. Syrealkohol anvendes som affarvningsmiddel. Methylenblåt bruges som modpletten. Farvningsprocedure udføres som følger.
- Den primære plet (carbol fuchsin) påføres den faste prøve på objektglasset (Alle celler farves i rød farve).
- Sliden opvarmes ved dampning i 5 minutter, hvilket driver pletterne korrekt ind i cellerne.
- Derefter tilsættes affarvningsopløsningen (Dette fjerner det røde farvestof fra alle celler undtagen de syrehurtige bakterier).
- Methylenblåt tilsættes som en modplet (Den farver alle affarvede bakterieceller).
- Syrehurtige bakterier forbliver røde, mens ikke-syrehurtige bakterier pletter i blåt.
Hvad er ligheden mellem gramfarvning og syrehurt?
- Gram plet og syrefast er to forskellige farvningsteknikker.
- Begge teknikker kategoriserer bakterier i to grupper.
- Begge teknikker bruger to pletter og en affarvning.
Hvad er forskellen mellem gramplet og syrehurt?
Diff artikel midt foran bordet
Gram Stain vs Acid Fast |
|
| Gramfarvning er en differentiel farvningsteknik, der adskiller bakterier i to grupper Gram-positive bakterier og Gram-negative bakterier. | Syrehurtig plet er en differentiel plet, der bruges til at identificere syrehurtige organismer fra ikke-syrehurtige organismer. |
| Primær plet | |
| Krystalviolet er den almindeligt anvendte primære plet i gramfarvning. | Carbol fuchsin er den primære plet, der anvendes i syrefast. |
| Affarvningsmiddel | |
| 95% alkohol anvendes som affarvningsmiddel i gramfarvning. | Syrealkohol bruges som affarvningsmiddel i syrefast. |
| Counter plet | |
| Gram plet bruger safranin som modpletten. | Syrehurtig plet bruger methylenblåt som modplet. |
| Observation | |
| Gramnegative bakterier observeres i plukkefarve, og grampositive bakterier observeres i lilla farve. | Syrehurtige bakterier observeres i rød farve og ikke syrehurtige bakterier observeres i blå farve. |
Resumé - Gram Stain vs Acid Fast
Visualisering af mikroorganismer i levende tilstand er vanskelig. Derfor anvendes biologiske pletter og farvningsprocedurer i vid udstrækning til at undersøge deres egenskaber. Differentiel farvning er en type farvningsteknik, der bruges til at differentiere bakterier. Gramplet og syrefast plet er to forskellige farvningsteknikker. Gramfarvning skelner mellem gramnegative bakterier og grampositive bakterier baseret på tykkelsen af deres cellevægge. Syrehurtig farvning adskiller syrehurtige bakterier fra ikke-syrehurtige bakterier baseret på mycolsyreindholdet i cellevæggen. Dette er forskellen mellem syrefast og gram plet.
Download PDF-version af Gram Stain vs Acid Fast
Du kan downloade PDF-version af denne artikel og bruge den til offlineformål som pr. Citatnote. Download venligst PDF-version her Forskellen mellem gramfarvning og syrehurt.
