Nøgleforskel - forbigående vs stabil transfektion
Transfektion er en proces, der er involveret i genoverførslen af eukaryote celler ved anvendelse af kemiske eller fysiske metoder. Transfektion kan klassificeres i to hovedtyper med navnet transient transfektion og stabil transfektion. Under forbigående transfektion integrerer genet af interesse ikke med værtsgenomet og udtrykkes midlertidigt inden for værten på kort sigt, mens genet af interesse integreres med værtsgenomet i stabil transfektion og opretholdes i lang tid i flere generationer. Dette er nøgleforskellen mellem forbigående og stabil transfektion. I begge tilfælde er transfektion vellykket, og gener udtrykkes.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er transient transfektion
3. Hvad er stabil transfektion
4. Sammenligning side om side - Transient vs stabil transfektion
5. Resumé
Hvad er forbigående transfektion?
Transfektion er et vigtigt redskab til at indsætte gener i eukaryote celler. Blandt de to typer transfektion er forbigående transfektion en almindelig måde i genoverførsel. Via en vektor transformeres fremmede gener inde i værtsceller. Når fremmed DNA kommer ind i værtscellen, har den to muligheder. Det kan enten integreres med værtsgenomet og replikere eller forblive inde uden at integrere i genomet. Transient transfektion udviser den midlertidige ekspression af de indsatte gener uden at integrere i værtsgenomet. Gener udtrykker og producerer det kodede protein, indtil cellen deler sig. På grund af manglende evne til integration kan den imidlertid ikke replikere og indgå i fremtidige generationer. Denne type transfektion er vellykket i en kort periode. Under celledeling eller på grund af nogle andre faktorer udsættes fremmed DNA for nedbrydning. Transient transfektion vises, når det fremmede DNA er i form af stærkt oprullet DNA.
Figur 01: Forbigående transfektion
Hvad er stabil transfektion?
Stabil transfektion viser en vellykket fremmedgenintegration i værtsgenomet. Når først fremmed DNA kommer ind i værtscellen, integreres en del af det fremmede DNA med værtsgenomet og bliver en del af det. Derfor replikerer fremmed DNA også og overføres til fremtidige generationer, når værtsgenomet replikerer. Denne type transfektion er kompleks og sjælden. På grund af den stabile transfektion i genomet opretholdes dette træk imidlertid i en længere periode på flere generationer.
Stabil transfektion er en vanskelig proces og kræver en effektiv afgivelse af DNA og celleoptagelse af det fremmede DNA i dets genom. Derfor favoriserer lineært DNA den stabile transfektion end cirkulært DNA. Imidlertid er stabil transfektionshastighed ca. en ud af 104 transformerede celler. Stabil transfektion kan observeres ved cotransfomation af en valgbar markør og udføre den kunstige selektion på et medium.
Figur 02: Stabil transfektion
Hvad er forskellen mellem forbigående og stabil transfektion?
Diff artikel midt foran bordet
Forbigående vs stabil transfektion |
|
| Fremmed DNA integreres ikke i et værtsgenom. | Fremmed DNA integreres med værtsgenomet og bliver en del af det. |
| Replikering inden for værten | |
| Transient transficerede gener replikerer ikke inden i værten. Derfor overføres ikke gener til de næste generationer. | Gener replikeres inden for værten og overføres til fremtidige generationer. |
| Genvarens tidsvarighed | |
| Gener udtrykkes i en begrænset periode, og derefter ødelægges de. | Gener bliver en del af genomet og udtrykkes i generationen i lang tid. |
| Brug | |
| Dette er nyttigt til at studere virkningerne af kortvarig ekspression af gener eller genprodukter. | Dette er nyttigt til at studere effekterne af genudtryk på lang sigt. |
| Påvisning af transfektionen | |
| Gener udtrykkes og kan let detekteres ved at indsætte et reportergen. | Stabil transfektion kan let detekteres ved at indsætte en valgbar markør og vælge gennem kunstig markering på medier. |
| Forekomst og proces | |
| Transient transfektion er almindelig og ikke kompleks at udføre. | Stabil transfektion er sjælden i forekomsten og kompleks at udføre. |
| DNA-arten | |
| Meget supercoiled DNA er velegnet til transient transfektion. | Lineært DNA er egnet til stabil transfektion. |
| Ansøgninger | |
| Dette bruges til studier af gennedbrydning eller dæmpning med inhiberende RNA'er, proteinproduktion i lille skala | Dette bruges til proteinproduktion i større, længerevarende farmakologiske undersøgelser, genterapi, forskning i mekanismerne til langsigtet genetisk regulering |
Resumé - forbigående vs stabil transfektion
Forbigående og stabile transfektioner er to typer transfektioner, der er vist under genet, der overføres til eukaryote celler af ikke-virale baserede systemer. Transformeret fremmed DNA er ikke integreret med værtsgenomet i forbigående transfektion, mens det integreres med værtsgenomet i stabil transfektion. Cirkulært oprullet DNA er vist forbigående transfektion, mens lineært DNA foretrækker stabil transfektion. Dette er forskellen mellem forbigående og stabil transfektion. Imidlertid er forbigående transfektion mere almindelig og let sammenlignet med stabil transfektion. Men valget af en blandt to afhænger af formålet med genoverførslen og varigheden af forskningsprojektet.
