Nøgleforskel - Direkte vs Indirekte ELISA
En enzymbundet immunanalyse (ELISA), også kendt som enzymimmunanalyse, er en serologisk test, der detekterer antistoffer i blodet. Det bruges som et diagnostisk værktøj til at finde ud af, om patienten har været udsat for en bestemt virustype eller et andet infektiøst middel (antigen), og om kroppen har produceret antistoffer mod infektionen. ELISA kan også identificere tidligere og aktuelle infektioner. Derfor bruges ELISA ofte som en prescreening-test af lægerne inden dybdegående analyse af sygdomme. Denne test kan udføres i laboratoriet ved at tage en blodprøve fra patienten. Der er to typer ELISA-test: direkte ELISA og indirekte ELISA. Hovedforskellen mellem direkte og indirekte ELISA er, at indirekte ELISA er mere følsom og kræver tilsætning af et sekundært antistof, mens direkte ELISA er mindre følsomt og kun bruger et primært antistof.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er direkte ELISA
3. Hvad er indirekte ELISA
4. Sammenligning side om side - Direkte vs indirekte ELISA
5. Resumé
Hvad er direkte ELISA?
ELISA er en sygdomsdiagnostisk test udført for at identificere tilstedeværelsen af bestemte antigener eller antistoffer i blodet. Det udføres som en pladeassay. Det bruger antistoffer forbundet med let analyserede enzymer. Antigeners tilstedeværelse i serumprøven binder til specifikke antistoffer forbundet med enzymer. I det sidste trin tilsættes et specifikt substrat for at reagere med enzymet. Enzymet omdanner substratet til et farvet eller signalproducerende produkt. Farveændringen i det kemiske substrat afslører tilstedeværelsen af et bestemt antistof i serumprøven. Direkte ELISA-test bruger kun et primært antistof, der er knyttet til enzymet. Efter binding til antigenet skifter det hurtigt farven, hvilket indikerer tilstedeværelsen af det infektiøse middel i blodet. Imidlertid,intensiteten af signalerne er svagere i direkte ELISA, da epitoperne er begrænset til binding af antigenerne. Derfor er direkte ELISA mindre følsom sammenlignet med indirekte ELISA.
Figur 01: Direkte ELISA-test
Hvad er indirekte ELISA?
ELISA kan udføres under anvendelse af to typer antistoffer, nemlig; primært antistof og sekundært antistof. Indirekte ELISA-værktøj bruger begge typer antistoffer til at forstærke signalerne til bedre påvisning. Indirekte ELISA-teknik udføres som følger.
- Plader inkuberes med antigener og vaskes for at blokere ikke-specifik binding.
- Derefter tilsættes primære antistoffer og vaskes.
- Enzymbundet sekundært antistof tilsættes og vaskes.
- Et substrat tilsættes og får lov til at reagere med enzymer.
- Signaler detekteres, og tilstedeværelsen eller fraværet af det specifikke antigen i prøven identificeres.
I indirekte ELISA-test kan flere sekundære antistoffer binde til et enkelt primært antistof. Sekundære antistoffer er forbundet med let analyserede enzymer. Derfor kan en binding afgive et stærkt signal på grund af mere end én interaktion. Derfor er indirekte ELISA mere følsom end direkte ELISA. Imidlertid kan indirekte ELISA afgive uspecifikke signaler på grund af krydsreaktioner af de sekundære antistoffer.
Figur 02: Indirekte ELISA-test
Hvad er forskellen mellem direkte og indirekte ELISA?
Diff artikel midt foran bordet
Direkte vs indirekte ELISA |
|
| Direkte ELISA er mindre følsom sammenlignet med indirekte ELISA. | Indirekte ELISA er mere følsom. |
| Tid taget | |
| Direkte ELISA test er en hurtig proces. | Indirekte ELISA er tidskrævende. |
| Anvendelse af antistoffer | |
| Kun en type antistoffer (primære antistoffer) anvendes i direkte ELISA. | Primære og sekundære antistoffer anvendes til indirekte ELISA. |
| Forbindelse med enzymer | |
| Primære antistoffer er forbundet med enzymer. | Sekundære antistoffer er forbundet med enzymer. |
| Krydsreaktivitet af anden antistoffer | |
| Direkte ELISA eliminerer krydsreaktivitet af andet antistof. | Indirekte ELISA påvirkes af krydsreaktivitet af andet antistof. |
| Signaler | |
| Signaler er svage sammenlignet med indirekte ELISA. | Signaler forstærkes i indirekte ELISA. Derfor er det let at opdage. |
Resumé - Direkte vs Indirekte ELISA
ELISA er en biokemisk teknik, der hovedsageligt anvendes i immunologi til at detektere tilstedeværelsen af et antistof eller et antigen i en patients blodprøve. Det kan udføres via to processer kendt som direkte eller indirekte ELISA. Direkte ELISA-test bruger kun primære antistoffer til at detektere antigenet, mens indirekte ELISA bruger både primære og sekundære antistoffer. I direkte ELISA mærkes primære antistoffer, mens i indirekte ELISA sekundære antistoffer mærkes. Dette er forskellen mellem direkte og indirekte ELISA.
