Nøgleforskel - Phusion vs Taq Polymerase
DNA-polymeraser er meget anvendte enzymer i molekylærbiologiske teknikker og er også naturligt til stede i alle organismer, der gennemgår DNA-replikation. De er de vigtigste polymeriserende enzymer, der involverer under replikation. DNA-polymerase er i stand til at tilføje nukleotider til den frie 3'-ende af DNA-strengen og derved forårsage forlængelse af en ny streng. På nuværende tidspunkt er det på grund af udviklingen af molekylærbiologi inden for sygdomsdiagnostik og industrielle anvendelser vigtigt at fremstille polymeraser med forskellige gavnlige egenskaber. Dette øger nøjagtigheden af metoden og gør den til en hurtigere teknik. Phusion og Taq polymerase er to kommercielt producerede termostabile polymeraseenzymer, der anvendes i specielle molekylære applikationer. Fusion er en DNA-polymerase isoleret fra Pyrococcus furiosus og bruges hovedsageligt i kloningseksperimenter for at øge troværdigheden. Taq DNA-polymerase er den standard-DNA-polymerase, der anvendes i Polymerase Chain Reaction (PCR), og den er isoleret fra den termostabile bakterie; Thermus aquaticus. Hovedforskellen mellem de to enzymer er kildemikroorganismen. Fusion er isoleret fra ekstremofilen, Pyrococcus furiosus, mens Taq-polymerase er isoleret fra den termofile, Thermus aquaticus. Taq-polymerase er isoleret fra termofilen Thermus aquaticus. Taq-polymerase er isoleret fra termofilen Thermus aquaticus.
INDHOLD
1. Oversigt og nøgleforskel
2. Hvad er Phusion
3. Hvad er Taq Polymerase
4. Ligheder mellem Phusion og Taq Polymerase
5. Sammenligning side om side - Phusion vs Taq Polymerase i tabelform
6. Resumé
Hvad er Phusion?
Phusion DNA-polymerase er en hidtil ukendt polymerase, der fremstilles ved at isolere enzymet fra Pyrococcus furiosus, som er en ekstremofil Archaea. Disse mikrober opholder sig under ekstremt høje temperaturforhold, hvorved polymerasen bliver en meget varmestabil polymerase. Fusionspolymerase anvendes til at opnå ekstrem troskab over den konventionelle termostabile polymerase; Taq polymerase. Fusionspolymerase er i stand til at amplificere lange skabeloner op til 7,5 kb genomisk DNA. Den optimale polymerisation kapacitet Phusion polymerase er ved 72 0 C. Phusion anvendes også i kloning produkter til sekventering, ekspression analyse og mutationsanalyse.
Phusion DNA-polymerase har 3 '- 5' exonukleaseaktivitet. Dette muliggør korrekturlæsning af den nyligt syntetiserede streng efter syntesen. Derfor er nukleotid-uoverensstemmelser let repareret. Således har den en mindre fejlprocent. Generelle fordele ved Phusion polymerase er;
- Ekstrem troskab
- Høj hastighed og reduceret forlængelsestid
- Robuste reaktioner og kræver minimal optimering
- Højt udbytte
Figur 01: Fusion
Den største ulempe ved Phusion-polymerase er, at den inhiberes i nærværelse af deoxyuridintriphosphat (dUTP). Når dUTP'er akkumuleres i reaktionsblandingen, kan det hæmme virkningen af Phusion-polymerase. Dette forhindres ved at behandle reaktionsblandingen med dUTPase før tilsætning af enzymet. På nuværende tidspunkt anvendes en dUTP-resistent variant af Phusion-polymerase kendt som Pfu Turbo i stedet for Phusion-polymerase som et middel til dette problem.
Hvad er Taq Polymerase?
Opfindelsen af Taq DNA-polymerase har revolutioneret området molekylærbiologi. Det løste et stort problem i DNA-amplifikation. Taq DNA-polymerase er et varmestabilt polymeraseenzym, der ekstraheres og isoleres fra den termofile bakterie, Thermus aquaticus. Opdagelsen af disse enzymer fører til udviklingen af PCR. Dette enzym har tilladt anvendelse af polymerasekædereaktion i DNA-amplifikation i stedet for konventionelle besværlige kloningsteknikker. PCR anvendes nu inden for molekylær diagnostik, landbrugs- og industriområder med mange nye variationer tilføjet til teknikken.
Figur 02: Taq Polymerase
Taq DNA-polymerase fungerer ved det optimale temperaturinterval mellem 72 0 C - 80 0 C. Taq DNA-polymerase kræver en co-faktor; magnesium for dets funktion. Taq-polymerase har ikke 3 '- 5' korrekturlæsningsevnen, derfor er fejlhastigheden for Taq DNA-polymerase høj sammenlignet med flere nyere typer DNA-polymeraser, såsom Phusion-polymerase osv. Men populariteten af Taq DNA-polymerase forbliver den det samme på tværs af videnskabens verden på grund af enzymets bekvemmelighed og fleksibilitet.
Hvad er ligheden mellem Phusion og Taq-polymerase?
- Både Phusion- og Taq-polymeraseenzymer er polymeriserende enzymer, der er i stand til at tilføje nukleotider til den 3'-frie ende af DNA-strengen.
- Både Phusion- og Taq-polymeraser kræver en primersekvens for at igangsætte polymerisation.
- Både Phusion- og Taq-polymeraser er varmestabile.
- Både Phusion- og Taq-polymeraser anvendes i PCR-mekanismer til amplifikation af DNA.
- Når polymerase tilsættes til reaktionsblandingen, tilsættes både Phusion- og Taq-polymeraser sidst for at sikre effektiviteten af enzymet.
- Både Phusion- og Taq-polymeraser syntetiseres kommercielt til eksperimentelle formål med molekylærbiologi.
- Både Phusion- og Taq-polymeraser kræver en kofaktor for at fuldføre dens funktion.
Hvad er forskellen mellem Phusion og Taq Polymerase?
Diff artikel midt foran bordet
Phusion vs Taq Polymerase |
|
| Fusion er en DNA-polymerase isoleret fra Pyrococcus furiosus og bruges hovedsageligt i kloningseksperimenter for at øge troværdigheden. | Taq DNA-polymerase er den almindelige DNA-polymerase, der anvendes i Polymerase Chain Reaction (PCR), og den er isoleret fra den termostabile bakterie, Thermus aquaticus. |
| Kildeorganisme | |
| Fusion ekstraheres fra ekstremofil archaea - Pyrococcus furiosus. | Disse litterære værker spænder fra koloniseringsperioden til dekoloniseringsperioden. |
| Evne til korrekturlæsning | |
| 3 '- 5' korrekt læseevne er til stede i Phusion. | 3 '- 5' korrekt læseevne er fraværende i Taq-polymerase. |
| Troskab | |
| High fidelity er der med Phusion. | Taq-polymerase viser lav troskab. |
| Forstærkning | |
| Fusion er i stand til at amplificere lange DNA-fragmenter. | Taq-polymerase er i stand til at amplificere meget kortere DNA-fragmenter. |
| dUTP Forgiftning | |
| Fusionshandling hæmmes af den ulige ophobning. | Taq-polymerase hæmmes ikke af dUPT. |
Resumé - Phusion vs Taq polymerase
Phusion og Taq DNA-polymerase er to varmestabile polymeraser, der anvendes i PCR-teknikker. Fusion er en polymerase isoleret fra ekstremofilen, Pyrococcus furiosus, mens Taq er isoleret fra de termostabile bakterier Thermus aquaticus. Taq DNA-polymerase-opdagelse fører til PCR-opfindelsen. Phusion har mange fordele i forhold til Taq, der har gjort Phusion til en bedre mulighed for at producere high fidelity DNA. Imidlertid anvendes Taq-polymerase stadig som standardpolymeraseenzym i PCR. Dette er forskellen mellem Phusion og Taq polymerase.
